双抗体夹心法原理

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双抗体夹心法原理

　　双抗原夹心巧克力法的基本是抗原体或抗原的固相化及抗原体或抗原的酶标识。

　　融合在固相媒介表层的抗原体或抗原仍维持其医学免疫学特异性，酶标识的抗原体或抗原既保存其医学免疫学特异性，又保存酶的活性。

　　下边就为大伙儿详细介绍双抗原夹心巧克力法的有关专业知识。

　　双抗原夹心巧克力法，是将带有己知抗原的抗血清吸咐在少量滴定管板上的小圆孔里，清洗一次；加待测抗原体，如二者是特异的，则产生融合，随后把不必要抗原洗去；添加与被测抗原体呈特异反映的酶联抗原，使产生"夹心巧克力"；添加该酶的底物，若见到有色板块的酶解物质造成，表明在孔内壁存有相对的抗原体。

　　双抗原夹心巧克力法的操作步骤是：

　　(1)将特异性抗原与固相媒介联接，产生固相抗原：清洗去除未融合的抗原及残渣。

　　(2)加待检标本采集：使之与固相抗原触碰反映一段時间，让标本采集中的抗原体与固相媒介上的抗原融合，产生固相抗原体一氧化氮合酶。

　　清洗去除别的未融合的物质。

　　(3)加酶标抗原：使固相免疫复合物上的抗原体与酶标抗原融合。

　　完全清洗未融合的酶标抗原。

　　这时固相媒介上含有的酶量与标本采集中待检物质的量成正比。

　　(4)加底物：夹心巧克力式一氧化氮合酶中的酶催化反应底物变成有色板块物质。

　　依据颜色反应的水平开展该抗原体的判定或定量分析。

　　依据一样基本原理，将生物大分子抗原体各自制取固相抗原体和酶标抗原体结合物，就可以用双抗原体夹心巧克力测定方法标本采集中的抗原。

　　胶体金法是一种常用的标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。

　　胶体金法是由氯金酸(HAuCl4)在白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等还原剂的作用下，聚合成相应大小的金颗粒，并由于静电作用而使金颗粒成为一种稳定的胶体状态，形成携带着负电的疏水胶溶液，因为成为了稳定的胶体状态，所以被称为胶体金。

　　胶体金法有其独特的优点，近年已在各种生物学研究中广泛使用.在临床使用的免疫印迹技术几乎都使用其标记。

　　扩展资料：

　　胶体金法的方法原理介绍：

　　1、双抗体夹心法原理，主要用于较大分子量的蛋白（抗原）的检测。

　　要求两株抗体针对一个抗原的不同位点才可以。

　　2、竞争法原理，主要用于小分子抗原（毒品、农药、肽链德国）的检测。

　　由于抗原分子量小不能直接固定于NC膜上，常常用化学方法把小分子偶联到BSA等大分子物质上再固定于NC膜上。

　　3、间接法原理，主要用于血清中抗体检测，纯化或者重组的抗原固定于NC膜上，标记多为蛋白A。

　　参考资料来源：百度百科-胶体金法